對(duì)于凋亡細(xì)胞的檢測(cè)，皺縮、變形、空泡化，抑或裂解為凋亡小體，都逃不過(guò)光學(xué)倒置顯微鏡的火眼金睛。

吉姆薩染色、瑞氏染色等兩位“助攻”齊上陣，將凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質(zhì)分割成塊狀等典型形態(tài)一展無(wú)遺，以確保沒(méi)有漏網(wǎng)之魚(yú)。

吉姆薩染色實(shí)驗(yàn)

吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)。對(duì)細(xì)胞著色后便于觀察，方便對(duì)凋亡細(xì)胞做出檢測(cè)判斷。

PH對(duì)細(xì)胞染色有一些影響。細(xì)胞里各種成分均不蛋白質(zhì)，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)系兩性電解質(zhì)，帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境里正電荷增多，易和伊紅結(jié)合，染色為偏紅；在偏堿性環(huán)境里負(fù)電荷增多，易和美藍(lán)或天青結(jié)合，染色偏藍(lán)。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.將顯影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盤(pán)中。

（1）1個(gè)盤(pán)：pH6.8 10 mmol/l 磷酸鈉緩沖液，所配的25倍稀釋的吉姆薩染液。

（2）3個(gè)盤(pán)：水。

（3）脫水系列溶液：

①3個(gè)盤(pán)：分別盛50%、70%和95%乙醇。

②2個(gè)盤(pán)：盛有100%乙醇。

③3個(gè)盤(pán)：盛有二甲苯。

2.在25倍稀釋的吉姆薩染液中染玻片20 s（依染色時(shí)間決定染色的強(qiáng)弱），將玻片在水中浸泡3次，每次2 min。

3.連續(xù)用乙醇脫水系列溶液處理，每盤(pán)中浸泡2 min，將玻片移至二甲苯盤(pán)中，毎次浸泡2 min，共3次。

4.在通風(fēng)櫥中，按如下操作壓片固定：用一平頭鑷（拿在左手），從二甲苯中取出一塊玻片，夾住磨面端置水平。加4滴Permount 的于另一端（切片所處位置），左手拿一干凈的蓋玻片，很緩慢地放在載玻片上（在加壓片固定介質(zhì)和蓋玻片前，勿使玻片變干，因微小氣泡會(huì)造成人為假象）。

5.用3MM 濾紙，沿蓋玻片邊緣，小心吸去多余固片介質(zhì)/二甲苯，并擦拭載玻片背面（勿擦拭蓋玻片）。

6.將玻片平放于一硬紙盒盤(pán)上，置42℃溫孵箱2天使之凝固。

7.以剃須刀片小心刮去載玻片背面殘留膠乳，染料及固片介質(zhì)。用鏡頭紙或普通棉紙擦去塵埃。放入玻片盒，必要時(shí)，載玻片上再注明標(biāo)簽。

8.顯微鏡觀察玻片，觀察時(shí)可依信號(hào)強(qiáng)弱，調(diào)節(jié)光亮。